酵母单杂交技术(Yeast One-Hybrid, Y1H)是一种 研究蛋白质和特定DNA序列相互作用的技术方法。该技术最早由Li等人在1993年提出,基于酵母双杂交技术发展而来。其核心原理是利用酵母细胞作为宿主,通过检测报告基因的表达来筛选与特定DNA序列结合的蛋白质。
酵母单杂交技术主要包括以下四个流程:
筛选含有报告基因的酵母单细胞株:
首先,选择一个含有特定报告基因(如LacZ)的酵母单细胞株。
构建表达文库:
然后,构建一个包含大量不同DNA片段的表达文库,这些片段可能包含与目标DNA序列互补的序列。
重组质粒转化至酵母细胞:
将表达文库中的每个DNA片段克隆到含有转录因子结合位点的载体中,并转化到酵母细胞中。
阳性克隆菌株的筛选:
通过检测报告基因的表达情况,筛选出那些能够与目标DNA序列结合的转录因子基因。
这种技术的主要优势在于它可以直接从基因文库中筛选出与特定DNA序列结合的蛋白质,而无需进行复杂的蛋白质分离和纯化操作。这使得酵母单杂交技术在蛋白研究中具有显著的优势,特别是在研究真核细胞内的基因表达调控方面。